HPLC: Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi
HPLC (High Performance Liquid Chromatography), karmaşık karışımlardaki bileşikleri fizikokimyasal etkileşimlere dayalı olarak ayıran ve miktarlarını ölçen analitik bir yöntemdir. Yüksek basınç altında kolondan geçirilen numune, bileşiklerin kolon dolgu maddesiyle etkileşim farklılıkları sayesinde ayrılır; dedektör (UV/DAD) her bileşiğin miktarını ölçer.
Nasıl Çalışır?
- Numune Enjeksiyonu: Numune, otomatik enjektörle akış hattına verilir
- Ayrım: Bileşikler, kolon içi sabit faz ile etkileşim farklarına göre farklı hızlarda ilerler
- Elüsyon: Mobil faz gradyanı veya izotik akışla bileşikler kolondan sırayla çıkar
- Tespit: UV/DAD dedektörü her bileşiğin absorbsiyonunu zamanla kaydeder (kromatogram)
- Kantifikasyon: Pik alan/yüksekliği, kalibrasyon eğrisiyle miktar hesabına dönüşür
Yaygın Modlar
- Ters faz (RP-HPLC): En yaygın mod; C18 kolonlar, sulu-organik mobil faz
- Normal faz: Polar sabit faz, non-polar mobil faz
- İyon değişimi: Yüklü bileşiklerin ayrımı
- HILIC: Çok polar bileşikler için
Neden HPLC?
- Kesinlik ve doğruluk: %1'in altında RSD ile tekrarlanabilir sonuçlar
- Duyarlılık: İz düzeylerde (ppm-ppb) bileşik tespiti
- Özgürlük: Gaz kromatografisine uygun olmayan termolabil/polar bileşikler analiz edilir
- Regülasyon geçmişi: Farmakope ve ICH rehberlerinde yer alan tanınmış yöntem
- Geniş uygulama: Küçük molekülden peptidlere, ilaçtan gıda takviyesine
HPLC, ilaç kalite kontrolünün, gıda takviyesi doğrulamasının ve bitkisel ürün standardizasyonunun ortak dilidir. Analiz hizmetlerimiz hakkında bilgi almak için iletişim sayfamızı ziyaret edebilirsiniz.